服務熱線
86-021-52261560
01. 研究背景
(1) 研究問題：這篇文章主要探討了使用MaxCyte流式電穿孔技術進行病毒載體（包括腺相關病毒和慢病毒）生產的方法和效率。
(2) 研究難點：傳統的病毒載體生產技術勞動密集、步驟多且效率低，難以滿足大規模生產的需求。
(3) 相關工作：MaxCyte的流式電穿孔技術作為一種通用的瞬時轉染平臺，旨在解決病毒載體生產的諸多問題。
02. 研究方法
提出了使用MaxCyte流式電穿孔技術進行病毒載體生產的方法。具體來說包括：
(1) 細胞類型：該技術適用于貼壁細胞和懸浮細胞。
(2) 多質粒共轉染：MaxCyte系統可以同時轉染多個質粒，包括大質粒，從而制造復雜的病毒載體。
(3) 可擴展性：MaxCyte系統在不同規模的細胞培養中表現出一致的高轉染效率和細胞活力。
03. 實驗設計
(1) 大規模慢病毒生產：在貼壁HEK細胞中使用MaxCyte STX進行四質粒共轉染。
• HEK 293FT細胞在轉染前2-3天在10層細胞工廠中接種。
• 使用流式電穿孔技術進行共轉染，每天收集培養基并測量轉導單位。
(2) 懸浮細胞中的慢病毒生產：懸浮適應的HEK 293FT細胞在10L Wave Cellbags中培養，通過流式電穿孔技術轉染慢病毒組件質粒。
• 轉染后的細胞被返回Cellbags中。
• 在GMP合規的核心設施中進行3次生產運行，每次運行均顯示出高滴度。
(3) 不同規模下的慢病毒生產一致性：通過靜態電穿孔和流式電穿孔（使用MaxCyte）。
• 測量轉染后48小時的慢病毒滴度，結果顯示無論規模大小，生產力一致。
(4) 高效的高滴度AAV生產：在貼壁HEK細胞中使用MaxCyte STX進行三質粒共轉染。
• 轉染后48小時，幾乎100%的轉染細胞表現出強勁的轉基因表達。
• 通過qPCR分析測量細胞沉淀中的高滴度AAV。
04. 結果與分析
(1) 大規模慢病毒生產：在貼壁HEK細胞中，使用MaxCyte STX進行四質粒共轉染，每天收集培養基并測量轉導單位，結果顯示高效的生產能力。
(2) 懸浮細胞中的慢病毒生產：在懸浮適應的HEK 293FT細胞中，使用MaxCyte系統進行生產，3次生產運行均顯示出高滴度，表明該技術在懸浮細胞中的可擴展性和一致性。
(3) 不同規模下的慢病毒生產一致性：通過靜態和流式電穿孔在HEK細胞中生產慢病毒，結果顯示無論規模大小，生產力一致。
(4) 高效的高滴度AAV生產：在貼壁HEK細胞中，使用MaxCyte STX進行三質粒共轉染，結果顯示幾乎100%的轉染細胞表現出強勁的轉基因表達，并且通過qPCR分析測量到高滴度的AAV。
總體結論
MaxCyte的可擴展電穿孔技術允許對貼壁和懸浮適應細胞進行高效轉染。該技術能夠共轉染多個質粒和大質粒，制造復雜的病毒載體。MaxCyte轉染過程的一致性使得無論培養規模如何，生產產量都具有一致性。高效的懸浮細胞轉染簡化了使用MaxCyte過程進行病毒載體制造的可擴展性。通過MaxCyte電穿孔技術生成的高滴度AAV展示了該技術在制造應用中的多樣性。
* 本文轉載自「拓普百奧」微信公眾號，作者：宇文數學（已獲得作者授權）
>> 關于上海昊擴：
上海昊擴科學器材有限公司成立于2019年，總部位于上海，是一家實驗室設備/耗材及分析儀器的專業服務商。公司致力于為生物、醫藥、物性檢測、化工分析、食品、工業生產等相關領域客戶提供國內外高科技專業設備以及技術咨詢服務。
Copyright © 2025 版權所有：上海昊擴科學器材有限公司 ICP備案號:滬ICP備20016915號-1 管理登陸 技術支持：化工儀器網 總流量：221484 網站地圖